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ShRNAPiezo1通过VEGF/FGF-2抑制ApoE(-/-)小鼠动脉粥样硬化形成

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目的 探究机械敏感性离子通道Piezo1的shRNA干扰载体对ApoE缺陷小鼠动脉粥样硬化(AS)形成作用机制的实验研究。方法 构建shRNA Piezo1的siRNA的干扰载体,慢病毒转染人胚肾293T细胞,RT-PCR和Western Blot筛选最佳干扰序列。选取健康的雄性昆明小鼠10只和ApoE基因缺失[ApoE(-/-)]小鼠30只,分成4组:空白对照组,ApoE(-/-)AS模型组,ApoE(-/-)阴性对照组,shRNA-Piezo1干预组。利用HE染色,油红染色观察AS的斑块。利用RT-qPCR、Western-Blot和免疫组化等方法检测生长因子血管内皮生长因子(VEGF)和成纤维细胞生长因子2(FGF-2)的表达。结果 慢病毒转染结果显示,10-1 μl慢病毒量转染率最高,病毒滴度为1×108 TU/ml。RT-PCR和Western Blot检测结果显示,shRNA-Piezo1-homo-5762组的mRNA水平要明显低于shRNA-Piezo1-homo-1875组和shRNA-Piezo1-3299组,比较具有统计学差异(P<0.05);说明shRNA-Piezo1-homo-5762为有效干扰序列。HE染色和油红染色结果显示,shRNA-Piezo1干预组中主动脉粥样硬化斑块体积所占总体积的百分比与ApoE(-/-)AS模型组比,体积明显缩小,具有统计学差异(P<0.05)。PT-PCR和Western blot结果显示,shRNA-Piezo1干预组中主动脉VEGF和FGF-2表达量明显低于AS模型组,具有统计学差异(P<0.05)。结论 ShRNA-Piezo1通过抑制生长因子VEGF蛋白和FGF-2蛋白的表达发挥其抑制AS的作用。

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参考文献:

  • 2008

  • 1

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